Приготовление образца:
Сбор образцов: собирайте образцы, такие как кровь, ткань, слюна и моча в соответствии с целью эксперимента.
Экстракция ДНК: используйте выделенный комплект экстракции ДНК для извлечения ДНК из образца.
Приготовление реакции ПЦР:
Дизайн праймеров: дизайн специфических пары праймеров на основе целевой последовательности для амплификации матрицы ДНК.
Приготовьте реакционную смесь: включая матрицу ДНК, праймеры, буфер, ДНК -полимераза, DNTPS (дезоксинуклеозид трифосфаты), Mg 2+ и т. Д.
Установить PCR -программу:
Настройки прибора для ПЦР: введите параметры PCR -цикла, такие как температура предварительного нагрева 95 градусов, температура денатурации (например, 95 градусов), температура отжига (например, 55 градусов), температура удлинения (например, 72 градуса) и количество циклов.
Реакция ПЦР:
Добавьте образец: добавьте реакционную смесь в реакционный резервуар или чип ПЦР, и каждый образец обычно имеет одну реакционную скважину.
Выполните ПЦР: ПЦР -циклы в соответствии с предварительной программой, включая нагревание, охлаждение, отжиг и этапы расширения.
Анализ продукта:
Охлаждение после усиления: после завершения ПЦР образец кратко охлаждается на 4 градуса.
Электрофоретическое разделение: используйте гель -электрофорез, такую как электрофорез с агарозным гелем, для разделения продуктов ПЦР различных длины.
Сканирование флуоресценции: флуоресцентно меченные праймеры выделяют свет определенной длины волны в амплифицированном продукте, и прибор PCR считывает эти сигналы и записывает их.
Обработка и интерпретация данных:
Программное обеспечение для анализа данных: используйте специализированное программное обеспечение для анализа флуоресцентного сигнала и вычисления концентрации или относительной концентрации целевого фрагмента.
В результате интерпретация: на основе кривой ПЦР и базовой линии определить, является ли ПЦР успешной, существует ли целевой фрагмент и сколько она.
Запись и сохранение результатов:
Запишите результаты в экспериментальном отчете и должным образом сохраните исходные данные и образцы.